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Amine-activated SepFast MAG系列產(chǎn)品說(shuō)明書

 更新時(shí)間:2023-04-07    點(diǎn)擊量:780

Amine-activated SepFast MAG用于制備磁性色譜吸附劑。它與含有羧基的配體形成化學(xué)穩(wěn)定的酰胺鍵,他有一個(gè)長(zhǎng)間隔區(qū)(9個(gè)原子)。與目標(biāo)分子結(jié)合后,磁性樹脂可以很容易地在磁鐵的幫助下從生物原料中分離出來(lái)。

胺基活化瓊脂糖可用于固定含羧基或含醛的分子。耦合化學(xué)是基于碳二亞胺或還原胺化的,是項(xiàng)成功且有據(jù)可查的技術(shù)。

圖片3.png

1. 屬性

Amine-activated SepFast MAG 4 HF由高度交聯(lián)的4%磁性瓊脂糖制成。它可以在嚴(yán)苛的條件下操作使用,因此可以應(yīng)用于低pH值和某些高濃度有機(jī)溶劑。

由于瓊脂糖具有出色的親水性和低非特異性結(jié)合特性,長(zhǎng)期以來(lái)一直用于色譜分離。這些顆粒具有開孔結(jié)構(gòu),對(duì)大蛋白質(zhì)分子具有出色的傳質(zhì)性能。

通過在末端連接帶有胺基的長(zhǎng)親水鏈來(lái)激活基礎(chǔ)基質(zhì)。在碳二亞胺試劑存在下與含羧基配體反應(yīng),或在還原劑存在下與含醛配體反應(yīng)。Amine-activated SepFast MAG20%乙醇中的水懸浮液形式提供。

1  Amine-activated SepFast MAG的特性

可耦聯(lián)基團(tuán)

-COOH,CHO

基質(zhì)

高度交聯(lián)的4%瓊脂糖(4HF

粒徑

50-150 μm

間隔臂

9個(gè)原子

活化水平

10-25 μmol amine /ml medium

pH穩(wěn)定性

4-13(具有配體依賴性)

化學(xué)穩(wěn)定性

對(duì)偶聯(lián)配體能夠接受的所有常用的水性化學(xué)品穩(wěn)定

保存

4-8

*可根據(jù)要求提供其他粒徑

2. 配體固定化

以下是含羧基配體一般的偶聯(lián)流程

2.1  將目標(biāo)配體溶解在偶聯(lián)緩沖液中,pH值調(diào)整為4.5。偶聯(lián)緩沖液的體積可以固定凝膠體積一半或相同。

2.2  在過濾裝置中用至少倍體積的偶聯(lián)緩沖液清洗活化凝膠。

2.3  將洗凈并吸干的凝膠(來(lái)自步驟 2.2)轉(zhuǎn)移到步驟2.1 制備的溶液中。

2.4  碳二亞胺作為干粉或預(yù)先溶解的溶添加到漿液中,最終濃度為0.1 M。如果碳二亞胺預(yù)先溶解在水中,則將pH值調(diào)整為4.5。

2.5  在室溫或4-8℃下混合漿料

2.6   在第1個(gè)小時(shí)內(nèi)通過添加 0.1  M NaOH調(diào)節(jié)反應(yīng)pH值至4.5。

2.7 將偶聯(lián)反應(yīng)放置2-24小時(shí)。

2.8 5倍體積的0.1 M 醋酸鹽緩沖液 + 0.5 M NaCl,pH 4.0洗滌凝膠,然后用5倍體積的0.1 M Tris/HCl + 0.5 M NaClpH 8.0洗滌凝膠。重復(fù)上述洗滌2次以上。

2.9 使用前用工作/平衡緩沖液清洗凝膠。

3. 固定化效率的一般考慮

3.1 pH

偶聯(lián)反應(yīng)pH 4.5 - 7.5之間非常有效地進(jìn)行。但是可以優(yōu)化偶聯(lián)pH以獲得最佳結(jié)果(例如,高偶聯(lián)產(chǎn)率和高配體活性)。

偶聯(lián)反應(yīng)的第1個(gè)小時(shí)內(nèi),pH值會(huì)降低。要記得通過添加0.1 M NaOH來(lái)調(diào)節(jié)偶聯(lián)pH值。之后pH值會(huì)趨于穩(wěn)定。

3.2 偶聯(lián)方案

去離子水可直接用作偶聯(lián)溶液。應(yīng)避免使用含有氨基、巰基或羧基的緩沖溶液,因?yàn)樗鼈儠?huì)與配體偶聯(lián)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)。

可以引入稀釋的某些有機(jī)溶劑以提高配體的溶解度。應(yīng)事先測(cè)試此類溶劑的適用性。

3.3 碳二亞胺的選擇

應(yīng)使用水溶性碳二亞胺,例如1?乙基?3?(3?二甲基氨基丙基)碳二亞胺  (EDC)  1?環(huán)己基?3?(2?嗎啉代乙基碳二亞胺  (CMC)(通常合成為 metho?p?甲苯磺酸鹽)。EDC是常用的碳二亞胺試劑。

3.4 碳二亞胺的濃度

添加的碳二亞胺的應(yīng)以化學(xué)計(jì)的方式超過活化的胺基。建議以最終反應(yīng)漿料中的0.1  M作為起點(diǎn)。

3.5 反應(yīng)時(shí)間和溫度

可以優(yōu)化偶聯(lián)過程中配體和活化介質(zhì)之間的接觸時(shí)間以保持配體的生物活性。

典型的反應(yīng)時(shí)間是在室溫或冷藏室中過夜。

3.6 屏蔽剩余的活化配體

如果加入過量的配體,則可能不需要封閉殘留的活化基團(tuán)。

未與配體反應(yīng)的活化基團(tuán)應(yīng)在碳二亞胺存在下通過添加含有pH 8 - 9伯胺的額外小分子(例如1 M乙醇胺)來(lái)封端。

3.7 最終介質(zhì)的洗滌

偶聯(lián)反應(yīng)后需要將未連接或弱連接的配體WAN全洗掉。采用高pH值和低pH值交替的洗滌方法可以確保有效去除不需要的物質(zhì)。

4. 固定化親和介質(zhì)的使用

配體偶聯(lián)介質(zhì)可用于使用間歇攪拌罐模式或填充柱模式的純化。處理這種材料遵循與處理其他基于瓊脂糖基質(zhì)相同的原則。

5. 儲(chǔ)存

Amine-activated SepFast MAG應(yīng)在8℃下儲(chǔ)存。偶聯(lián)的濕介質(zhì)應(yīng)在防菌劑(例如20%乙醇)存在的情況下于4-8℃儲(chǔ)存。切勿凍存耦合介質(zhì)。

6. 更多信息

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7. 訂購(gòu)信息

產(chǎn)品

規(guī)格

貨號(hào)

Amine-activated

SepFast MAG 4HF

5 mL

350201-5ML

50 mL

350201-50ML

1 L

350201-1L

 


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