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支原體污染的檢測方法有哪些?

 更新時間:2023-10-18    點擊量:799

支原體污染一般在顯微鏡下不可見,很難察覺,但細(xì)胞會受到極大的損傷,主要通過以下途徑影響細(xì)胞生長及功能。那么支原體污染的檢測方法有哪些呢?讓我們一起來看看吧!

一、分離培養(yǎng)法

檢測方法:將待檢樣品接種到適合支原體生長的液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基中,如有支原體污染,液體培養(yǎng)基顏色會改變,固體培養(yǎng)基將會有菌落生長。

優(yōu)點:該方法被稱為支原體培養(yǎng)法的金標(biāo)準(zhǔn),可以檢測絕大多數(shù)支原體。

缺點:支原體生長到一定數(shù)量才能判斷是否有污染,檢測時間長,無法實現(xiàn)對支原體的快速檢測

二、原位染色法

檢測方法:通過染色試劑(如DAPI、Hoechst 等)對待測細(xì)胞培養(yǎng)物進行染色,在熒光顯微鏡下觀察待測樣品的熒光判斷支原體污染。

優(yōu)點:可清晰直觀的看到支原體微粒。

缺點:死亡細(xì)胞釋放的DNA也會被染色,在支原體輕度污染時,較難判斷是否有支原體污染。

三、化學(xué)發(fā)光法

檢測方法:利用支原體te有酶的活性并通過ATP依賴的螢光素酶催化的發(fā)光反應(yīng)進行檢測,通過比較檢測試劑加入前后ATP量的變化來確定樣品是否有支原體污染。

優(yōu)點:檢測快速,僅需15min即可完成檢測。

缺點:該方法只能檢測活的支原體,如果支原體死亡,將無法通過ATP的變化判斷支原體污染。

四、探針法qPCR

檢測方法:設(shè)計特異性引物和熒光探針,通過探針法qPCR高靈敏檢測培養(yǎng)的細(xì)胞等生物材料中是否有支原體污染。

優(yōu)點:靈敏度高,檢測快速,可一次性檢測大量樣品,PCR擴增后無需電泳分析即可判斷是否具有支原體污染。

缺點:該方法靈敏度很高,因此對實驗環(huán)境要求較為苛刻,且需要精密的qPCR儀器。

五、等溫擴增變色法

檢測方法:通過設(shè)計4-6對特異性引物,在一定的恒定溫度下,通過添加不同活性的酶和各自特異性引物進行核酸的快速擴增,并且通過顏色變化而無需電泳分析即可確定是否有支原體污染。

優(yōu)點:不需要反復(fù)的升溫和降溫,不需要精密的儀器,在恒定的溫度下即可對核酸進行擴增。反應(yīng)結(jié)束后,無需電泳分析,通過顏色變化即可判斷是否具有支原體污染。

缺點:對引物要求較高,需要設(shè)計多對引物,且擴增產(chǎn)物不能用于測序。

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