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磷酸化蛋白研究方法之wako預(yù)制膠

 更新時(shí)間:2024-01-18    點(diǎn)擊量:676

磷酸化蛋白對細(xì)胞通路的重要性毋庸贅述,這種關(guān)鍵的翻譯后修飾參wako預(yù)制膠與wako預(yù)制膠廣泛的細(xì)胞活動調(diào)節(jié),包括細(xì)胞周期、細(xì)胞分化、代謝和神經(jīng)元通訊等。蛋白磷酸化的異常也與眾多疾病相關(guān),是疾病機(jī)理研究的重要研究方向。那么你知道磷酸化蛋白研究方法嗎?讓我們一起來看看吧!

    Western Blot是評估蛋白磷酸化狀態(tài)的常用方法,且大部分實(shí)驗(yàn)室具備開展該實(shí)驗(yàn)的條件。用SDS-PAGE分離生物樣品,隨后轉(zhuǎn)移到膜(PVDF或硝酸纖維素膜),采用磷酸化抗體鑒定目的蛋白的磷酸化水平。

    由于磷酸化蛋白的檢測結(jié)果可能隨樣本處理或操作誤差而變化,研究人員通常用同一種蛋白的總表達(dá)水平作為參考,通過確定磷酸化蛋白和總蛋白的相對比值來反映磷酸化情況,判斷信號通路是否被激活。

    SuperSep™Phos-tag™是一種預(yù)制膠,預(yù)先加入50μmol/L的Phos-tag™Acrylamide,打開包裝即可直接使用。預(yù)制膠中含有Zn2+作為金屬離子,在中性凝膠緩沖液中保存穩(wěn)定性很好,得到的結(jié)果條帶也很整齊。wako預(yù)制膠即開即用,使用起來安全可靠,有效期長達(dá)6個(gè)月,操作方法與普通無二。

SuperSep™Phos-tag™預(yù)制膠的應(yīng)用

電泳條件:30mA(恒流),60 min

樣品:5μg/Laneα-酪蛋白(含磷酸化與去磷酸化a-酪蛋白)

普通SDS-PAGE只觀察到一條條帶,而Phos-tag™ SDS-PAGE里可見α酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化兩條條帶。

樣品緩沖液:Sample Buffer Solution(2ME+)(X4)

電泳緩沖液:SDS-PAGE緩沖液,pH8.5

染色:QUICK-CBB PLUS

  P10%(左):SuperSep Phos-tag™(50 μmol/L),10%,13 well

  P15%(中):SuperSep Phos-tag™(50 μmol/L),15%,13 well

  A15%(右):SuperSep™ Ace,15%,13well(不含Phos-tag™)

SuperSep™ Phos-tag™預(yù)制膠對比圖

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