国产精品久久久一区二区三区-欧洲美熟女乱一区二区三区-国产在线不卡一区二区三区-午夜福利国产午夜入口

歡迎來(lái)到天津益元利康生物科技有限公司網(wǎng)站!

022-66387942
關(guān)鍵詞搜索:尿素測(cè)定試劑盒,MedKoo代理,Permagen磁架
Technical articles技術(shù)文章
首頁(yè) > 技術(shù)文章 > qPCR實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)有哪些?

qPCR實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)有哪些?

 更新時(shí)間:2024-03-06    點(diǎn)擊量:1212
  q是指在PCR體系中加入熒光染料或熒光探針,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過(guò)C-值和標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。那么你知道qPCR實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)有哪些嗎?讓我們一起來(lái)看看吧!
 
  一、模板制備
 
  在進(jìn)行qPCR實(shí)驗(yàn)時(shí),需要根據(jù)所用試劑盒說(shuō)明書(shū)加入適量的起始核酸模板,過(guò)多的模板可能提高污染物含量,大大降低 PCR 效率,過(guò)少的模板可能會(huì)降低檢測(cè)靈敏性和重復(fù)性。
 
  根據(jù)檢測(cè)靶標(biāo)的性質(zhì)特點(diǎn),選擇合適的核酸抽提試劑盒同樣至關(guān)重要。小編有遇到老師想要通過(guò)qPCR的方法完成對(duì)microRNA的定量,但是發(fā)現(xiàn)待檢測(cè)樣本中目標(biāo)microRNA和內(nèi)參基因的擴(kuò)增曲線出峰時(shí)間都比較晚,內(nèi)參基因的Ct值甚至大于30(圖2)。排除實(shí)驗(yàn)操作問(wèn)題后發(fā)現(xiàn)原來(lái)是因?yàn)樗褂肦NA抽提試劑盒對(duì)小片段的microRNA回收效率低,不適合用于下游microRNA定量實(shí)驗(yàn)。
 
  二、引物探針的設(shè)計(jì)及儲(chǔ)存
 
  除了要保證模板的質(zhì)量外,引物探針的設(shè)計(jì)和穩(wěn)定性同樣至關(guān)重要。當(dāng)我們根據(jù)檢測(cè)靶標(biāo)設(shè)計(jì)特異性引物和探針時(shí),除了要考慮片段長(zhǎng)度,Tm值,堿基組成等基本要點(diǎn)外,還需格外注意引物,探針自身不能形成復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu),上下游引物內(nèi)部,引物探針之間不能出現(xiàn)結(jié)合的現(xiàn)象,因?yàn)檫@些都可能影響引物探針與目標(biāo)基因的結(jié)合,進(jìn)而影響最終的擴(kuò)增效率。
 
  除了引物探針在設(shè)計(jì)時(shí)需要格外花費(fèi)心思外,收到合成好的引物、探針如何稀釋,如何保存同樣有小tips。如果我們合成的引物探針是干粉狀或是需要稀釋時(shí),為了保證引物探針的穩(wěn)定性建議用1×TE buffer去溶解和稀釋。另外,引物的儲(chǔ)存濃度也可能影響其穩(wěn)定性,建議引物的儲(chǔ)存濃度不低于 10 μM,一般為100 μM 。此外如果引物和探針每次使用量較少時(shí),還應(yīng)該進(jìn)行分裝,保存在-20℃,以減少反復(fù)凍融的次數(shù)。
 
  更多有關(guān)qPCR實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng),請(qǐng)聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司。
掃一掃,關(guān)注微信
地址:天津市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)洞庭湖路220號(hào) 傳真:
版權(quán)所有 © 2025 天津益元利康生物科技有限公司  備案號(hào):津ICP備2022004463號(hào)-1

聯(lián)


国产精品香蕉一级免费| 九九九热视频免费观看| 中国一区二区三区不卡| 日韩欧美一区二区黄色| 99久久国产精品免费| 午夜视频免费观看成人| 亚洲中文字幕视频在线播放| 国内女人精品一区二区三区| 欧美人妻一区二区三区| 亚洲一级在线免费观看| 日韩精品免费一区三区| 国产欧美高清精品一区| 久久大香蕉精品在线观看| 久久热这里只有精品视频 | 美女黄片大全在线观看| 日韩欧美综合在线播放| 日韩黄片大全免费在线看| 国产精品一区日韩欧美| 欧美日韩少妇精品专区性色| 国产精品欧美一区两区| 日本在线高清精品人妻| 视频在线免费观看你懂的| 国产精品久久精品毛片| 精品少妇人妻一区二区三区| 国产又长又粗又爽免费视频| 91欧美一区二区三区成人| 果冻传媒在线观看免费高清| 懂色一区二区三区四区| 久久精品欧美一区二区三不卡 | 激情国产白嫩美女在线观看| 大香蕉久草网一区二区三区| 欧美黑人在线精品极品| 黄色片国产一区二区三区| 国产精品香蕉一级免费| 日韩中文字幕在线不卡一区| 少妇福利视频一区二区| 一区二区日本一区二区欧美 | 国产内射一级二级三级| 又大又紧又硬又湿又爽又猛| 中文字幕无线码一区欧美| 一区二区三区亚洲天堂|