Elabscience Annexin V-FITC/DAPI熒光雙染細胞凋亡檢測試劑盒現(xiàn)貨供應

Elabscience®自主研發(fā)的Annexin V-FITC/DAPI Apoptosis Kit，可用于檢測懸浮細胞和貼壁細胞的凋亡。 Annexin V是一種鈣離子依賴性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸 (PS)有高度親和力。當細胞發(fā)生凋亡時，膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸 (PS) 外翻到膜表面，而被熒光染料FITC標記的Annexin V結(jié)合，可通過流式細胞儀或熒光顯微鏡進行檢測。由于凋亡晚期或壞死細胞膜喪失完整性，而4',6-二脒基-2-苯基吲哚二yan酸鹽（4',6-Diamidino-2- Phenylindole, DAPI）可與雙鏈 DNA 特異性結(jié)合并產(chǎn)生強烈的熒光，與Annexin V搭配使用，可區(qū)分處于不同凋亡時期的細胞。本試劑盒檢測喜樹堿誘導的 Jurkat 細胞凋亡效果如下圖所示：

實驗操作：

一步法

1．細胞按照實驗方案進行凋亡誘導，300×g離心5min，棄上清，收集細胞，PBS 洗滌一次，輕輕重懸細胞并計數(shù)。

2．取1~5×105重懸的細胞，300×g離心5 min，棄上清。用PBS洗滌細胞一次，離心后棄上清，加入500μL稀釋的1×Annexin V Binding Buffer重懸細胞。

3．細胞懸液中加入5μL的Annexin V-FITC Reagent和5μL的DAPI Reagent (25μg/mL)。

4．輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育15~20 min。

5．立即上機檢測。如不能及時檢測，請于冰上避光靜置并于1小時內(nèi)完成檢測。

注：流式細胞儀檢測時Annexin V-FITC可用FITC通道，DAPI優(yōu)先選DAPI 通道，其次是Pacific Blue通道。

兩步法

1．細胞按照實驗方案進行凋亡誘導，300 ×g 離心 5 min，棄上清，收集細胞，PBS 洗滌一次，輕輕重

懸細胞并計數(shù)。

2．取1~5×105重懸的細胞，300×g離心5 min，棄上清。用PBS洗滌細胞一次，離心后棄上清，加

入100μL稀釋的 1×Annexin V Binding Buffer重懸細胞。

3．細胞懸液中加入2.5μL的Annexin V-FITC Reagent和2.5μL的DAPI Reagent (25μg/mL)。（由于兩步法分辨率更高，染色液用量減半依然可得到媲美一步法的效果；用戶亦可根據(jù)自己的模型進行滴定后加入適量的染色液，用更少的量獲得高質(zhì)量的結(jié)果。）

4．輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育 15~20 min。

5．加入 400 μL 稀釋的 1 × Annexin V Binding Buffer，混勻樣本。

6．立即上機檢測。如不能及時檢測，請于冰上避光靜置并于 1 小時內(nèi)完成檢測。

注：流式細胞儀檢測時 Annexin V-FITC可用FITC通道，DAPI 優(yōu)先選 DAPI 通道，其次是 Pacific Blue 通道。

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