產(chǎn)品名稱：NEB rCutSmart緩沖液(B6004V)現(xiàn)貨供應(yīng)

產(chǎn)品貨號(hào)：B6004V

產(chǎn)品品牌：NEB

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

NEB rCutSmart緩沖液(B6004V)適用于各類(lèi)限制性內(nèi)切酶，超過(guò) 210 種限制性內(nèi)切酶都能在rCutSmart緩沖液中表現(xiàn)出百分之bai的活性，從而極大地簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)過(guò)程中雙酶切反應(yīng)的準(zhǔn)備工作。rCutSmart 緩沖液中富含重組白蛋白，因此可減少試管數(shù)量和移液操作步驟。此外，許多DNA修飾酶也能在rCutSmart緩沖液中保持100% 活性，因此無(wú)需進(jìn)行后續(xù)純化。

此外，New England Biolabs為每種限制性內(nèi)切酶提供了一種采用顏色標(biāo)記的10X NEBuffer 反應(yīng)緩沖液，以確保酶保持最佳（100%）活性。New England Biolabs的大多數(shù)酶均配有四種標(biāo)準(zhǔn)NEBuffer 緩沖液之一。這些緩沖液中含有重組白蛋白。

使用方法：

同時(shí)用兩種限制性核酸內(nèi)切酶消化 DNA 底物（雙重消化）是一種常見(jiàn)的省時(shí)程序。選擇最hao的NEBuffer以提供優(yōu)化酶活性的反應(yīng)條件，并避免與某些酶相關(guān)的星形活性是一個(gè)重要的考慮因素。每種酶都配有最佳的 NEBuffer，以確保 100% 的活性。NEBuffer 組合物列在緩沖區(qū)頁(yè)面上。

設(shè)置雙消化

· 可以在 rCutSmart 緩沖液™中設(shè)置含有 NEB 限制性內(nèi)切酶的雙重酶解。否則，請(qǐng)選擇對(duì)兩種酶都具有最大活性的 NEBuffer。如果對(duì)星體活性有顧慮，請(qǐng)考慮使用我們的高保真 （HF®） 酶之一。

· 根據(jù)推薦方案設(shè)置反應(yīng)。任何反應(yīng)中甘油的最終濃度應(yīng)小于5%，以盡量減少星活性的可能性。例如，在50μl反應(yīng)中，加入的酶的總量不應(yīng)超過(guò)5μl。 NEBcloner也可用于確定推薦的雙消化條件。

· 如果需要兩種不同的孵育溫度，請(qǐng)選擇最佳反應(yīng)緩沖液并相應(yīng)地設(shè)置反應(yīng)。加入第一種酶并在所需溫度下孵育。然后，加熱滅活第一種酶，加入第二種酶并在推薦溫度下孵育。

· 根據(jù)酶在非最佳NEBuffer中的活性等級(jí)，可以調(diào)整單位數(shù)或孵育時(shí)間，以補(bǔ)償較慢的裂解速率。限制性內(nèi)切酶性能圖表可指示星形活性是否是次優(yōu)緩沖液的問(wèn)題。

設(shè)置順序消化

· 如果沒(méi)有兩種酶表現(xiàn)出>50%活性的緩沖液，則可以進(jìn)行順序消化。

· 使用推薦緩沖液中鹽濃度zui低的限制性核酸內(nèi)切酶設(shè)置反應(yīng)并孵育完成。

· 調(diào)整反應(yīng)的鹽濃度（使用少量濃鹽溶液）以近似第二限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)條件。

· 加入第二種酶并孵育以完成第二反應(yīng)。

· 或者，可以使用離心柱在第二次反應(yīng)之前分離DNA。

產(chǎn)品選購(gòu)：

天津益元利康生物科技有限公司，提供NEB rCutSmart緩沖液(B6004V)現(xiàn)貨供應(yīng)，歡迎選購(gòu)！