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植物組織蛋白質(zhì)提取方法

 更新時(shí)間:2024-09-27    點(diǎn)擊量:402

方法一:

  1. 1. 根據(jù)樣品重量(1g 樣品加入3.5ml 提取液,可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入),準(zhǔn)備提取液放在冰上。

  2. 2. 樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4 小時(shí))。

  3. 3. 用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃11100rpm20min4℃

  4. 4. 提取上清夜,樣品制備完成。

  5. 5. 蛋白質(zhì)提取液:300ml

  6. 1Mtris-HClPH845ml

  7. 甘油(Glycerol75ml

  8. 聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone6g

  9. 這種方法針對(duì)SDS-PAGE,垂直板電泳!

  10. 植物組織蛋白質(zhì)提取方法


方法二:

  1. 三氯醋酸丙酮沉淀法,這種方法針對(duì)雙向電泳,雜質(zhì)少,離子濃度小的特點(diǎn)!當(dāng)然單向電泳也同樣適用,只是電泳的條帶會(huì)減少!

  2. 1. 在液氮中研磨葉片

  3. 2. 加入樣品體積3 倍的提取液在-20℃的條件下過(guò)夜,然后離心(4℃8000rpm以上1 小時(shí))棄上清。

  4. 3. 加入等體積的冰浴丙酮(含0.07%β-巰基乙醇),搖勻后離心(4℃8000rpm以上1 小時(shí)),然后真空干燥沉淀,備用。

  5. 4. 上樣前加入裂解液,室溫放置30 分鐘,使蛋白充分溶于裂解液中,然后離心(15℃8000rpm 以上1 小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間以沒(méi)有沉淀為標(biāo)準(zhǔn)),可臨時(shí)保存在4℃待用。

  6. 5. 用Brandford 法定量蛋白,然后可分裝放入-80℃備用。

  7. 提取液:含10%TCA 0.07%β-巰基乙醇的丙酮

  8. 裂解液:2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 滅菌的去離子水中(終體積為5ml),使用前再加入1M DTT65ul/ml。


  9. 植物組織蛋白質(zhì)提取方法



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