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無血清培養(yǎng)基配方、使用方法

 更新時間:2024-10-31    點擊量:544

一、前言

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在生命科學(xué)研究領(lǐng)域是must的。在科研上,細(xì)胞培養(yǎng)基(medium)一般都會加入血清(Serum)來補(bǔ)充蛋白質(zhì)(protein)、生長因子(growth factor)或其他營養(yǎng)物質(zhì)(nutrients)等,大部分細(xì)胞培養(yǎng)會選擇使用胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)。近年來也陸續(xù)有多樣的血清種類,例如:人類血小板生長因子platelet-rich plasma, PRP)、小牛血清(bovine growth serum, BGS)等,中科百抗自研產(chǎn)品:Bestop™特級胎牛血清來源于無菌采集的健康胎牛血清,適用于各種難培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞、難培養(yǎng)原代細(xì)胞、部分干細(xì)胞(不包括難貼壁細(xì)胞),驗證的細(xì)胞典型代表有:A2780SK-Hep-1;HUVEC、神經(jīng)元細(xì)胞。

二、無血清培養(yǎng)基介紹

經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后,無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本,簡化分離純化步驟,避免病毒污染造成的危害。無血清培養(yǎng)基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的wanquan培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求,但對有些實驗卻不適合,如觀察一種生長因子對某種細(xì)胞的作用,這時需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子;又如需要測定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)(抗體、生長因子)的能力;或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞,以獲得它們的分泌產(chǎn)物。因此研制出無血清培養(yǎng)基一直是生物科學(xué)工作者努力的目標(biāo)。如有需要無血清培養(yǎng)基,請聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司。

無血清培養(yǎng)基配方、使用方法

、無血清培養(yǎng)基的基本配方

基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。

用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時,多數(shù)呈貼壁生長或兼性貼壁生長;而當(dāng)其在無血清、無蛋白培養(yǎng)基中生長時,由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細(xì)胞往往以懸浮形式生長。

添加組分包括以下幾大類物質(zhì):

(1促貼壁物質(zhì)

許多細(xì)胞必須貼壁才能生長,這種情況下無血清培養(yǎng)基中一定要添加促貼壁和擴(kuò)展因子,一般為細(xì)胞外基質(zhì),如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子,對許多細(xì)胞的繁殖和分化,起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化,這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。

(2促生長因子及激素

針對不同細(xì)胞添加不同的生長因子。激素也是刺激細(xì)胞生長、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì),有些激素是許多細(xì)胞bi要的,胰島素。

(3酶抑制劑

培養(yǎng)貼壁生長的細(xì)胞,需要用胰酶消化傳代,在無血清培養(yǎng)基中須含酶抑制劑,以終止酶的消化作用,達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。常用的是大豆胰酶;抑制劑。

(4結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白

常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大,可增加培養(yǎng)基的粘度,保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。

(5)  微量元素

硒是最常見的。

四、使用方法

目前,血清仍是動物細(xì)胞培養(yǎng)中最基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長旺盛以后,再換成無血清培養(yǎng)液。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應(yīng)過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細(xì)胞死亡,存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。在實驗后這些細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細(xì)胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前,要留有種子細(xì)胞,種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。

無血清培養(yǎng)基配方、使用方法





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