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細胞凋亡的檢測

 更新時間:2024-11-19    點擊量:423
  一、光學顯微鏡觀察
 
  凋亡細胞的主要特征為核染色質致密深染,形成致密質塊,有時可碎裂。
 
  檢測方法:細胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色,在高倍物鏡下觀察凋亡細胞的形態(tài)改變,結合顯微測量工具可作凋亡細胞計數(shù)。
 
  二、視頻時差顯微技術
 
  細胞培養(yǎng)中常用,通過相差顯微鏡可動態(tài)觀察細胞凋亡的變化過程,尤其是觀察細胞表和外形的變化。
 
  檢測方法:收集2×10^5細胞/ml培養(yǎng)的細胞,置于多孔培養(yǎng)板,加入凋亡誘導劑,在帶有自動攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細胞的動態(tài)改變,每隔1分鐘作序列攝影,連續(xù)24小時。如同進行熒光染色,可參熒光晃微鏡下觀察和攝影。
 
  三、電子顯微鏡觀察
 
  雖然光學顯微鏡下可以看見胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體,但凋亡細胞的形態(tài)學變化大多發(fā)生在超微結構,因此用光鏡觀察難以令人滿意,而透射電鏡可清楚地觀察到細胞結構在凋亡不同時期的變化。電鏡形態(tài)學觀察是迄今為止判斷凋亡經(jīng)典、可靠的方法,被認為是確定細胞凋亡的金標準。
 
  檢測方法:透射電鏡標本經(jīng)戊二醛和餓酸雙重固定,丙酮脫水,環(huán)氧樹脂包埋,超薄切片,醋酸枸椽酸電子又重染色,透射電鏡觀察。掃描電鏡標本經(jīng)戊二醛和二酸雙重固定,乙醇逐級脫水,二氧化碳臨界點干燥,真空噴金,掃描電鏡觀察。
 
  四、流式檢測
 
  流式細胞儀檢測凋亡細胞是通過檢查其光射特征及熒光參數(shù)時行的。細胞穿過流式細胞儀的激光束集點時使激光發(fā)生散射,分析散射光可以提供細胞大小及結構的信息。散射光包括前向散射光和左向角散射光兩種,前向散射光的強度與細胞大小、體積相產(chǎn),側向散射光的強度與細胞結構的析射性、顆粒性(granu-larity)有關。
 
  檢測方法:獲取密度1×10^6細胞/ml左右的細胞懸液,精洗,固定,熒光染料染色,上流式細胞儀分析。
 
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