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一、懸浮細(xì)胞都有什么？
懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞是指在體外培養(yǎng)時(shí)不依賴于支持物表面，而是在培養(yǎng)液中以懸浮狀態(tài)生長(zhǎng)的細(xì)胞。這類細(xì)胞通常來(lái)源于血液、淋巴組織，例如某些腫瘤細(xì)胞和轉(zhuǎn)化細(xì)胞。懸浮細(xì)胞的特點(diǎn)是細(xì)胞呈圓形，一般不貼于支持物上，易于大量繁殖。在體外培養(yǎng)的細(xì)胞類型中，懸浮細(xì)胞可以呈單個(gè)細(xì)胞或細(xì)小的細(xì)胞團(tuán)生長(zhǎng)。
以下是一些常見(jiàn)的懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞類型：
小鼠腹水瘤 S180
小鼠骨髓瘤 NS1 和 SP2/0
人造血系腫瘤細(xì)胞 U937、HL60、K562
人原髓細(xì)胞白血病細(xì)胞 HL-60
小鼠白血病細(xì)胞 WEHI-3
人白血病細(xì)胞 K-562
此外，還有一些工業(yè)上應(yīng)用的細(xì)胞系，如 CHO、BHK、HEK293 等，這些細(xì)胞主要用于重組蛋白質(zhì)生產(chǎn)。在獸用生物制品中，常用的懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞系包括 BHK21 和 MDCK 細(xì)胞。
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二、懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
1.提一天將細(xì)胞接種6孔板，每孔細(xì)胞數(shù)約為3×105 個(gè)，
2.第二天，換液后加入1mL培養(yǎng)基，再加20 μL 慢病毒，
3.混勻后繼續(xù)培養(yǎng)，
4.12h后觀察細(xì)胞狀態(tài)，并更換為新鮮培養(yǎng)基，
5.轉(zhuǎn)染1周后，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，中途可以換液，保持細(xì)胞的活性。
轉(zhuǎn)染（Transfection）是指將DNA或者RNA導(dǎo)入真核細(xì)胞中的過(guò)程。轉(zhuǎn)染的目的是產(chǎn)生重組蛋白，或特異性增強(qiáng)或抑制轉(zhuǎn)染細(xì)胞中的基因表達(dá)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染有哪些類型和方法呢？
1）根據(jù)導(dǎo)入的核酸存在于宿主細(xì)胞的時(shí)間長(zhǎng)短，可以分為瞬轉(zhuǎn)和穩(wěn)轉(zhuǎn)。
| 瞬轉(zhuǎn) | 穩(wěn)轉(zhuǎn) |
導(dǎo)入的DNA沒(méi)有整合到基因組中，而是保留在細(xì)胞核上 | 導(dǎo)入的DNA整合到基因組中 |
導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)不傳遞到子代； 遺傳改變只是暫時(shí)的 | 導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)能夠代代相傳；遺傳改變是的 |
不需要選擇性篩選 | 需要選擇性篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 |
DNA載體和RNA都可用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 | 只有DNA載體可用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染；RNA本身不能穩(wěn)定地導(dǎo)入細(xì)胞中 |
導(dǎo)入的遺傳物質(zhì)的高拷貝數(shù)導(dǎo)致高水平的蛋白質(zhì)表達(dá)。 | 單拷貝數(shù)或低拷貝數(shù)的穩(wěn)定整合的DNA導(dǎo)致較低水平的蛋白質(zhì)表達(dá)。 |
通常在轉(zhuǎn)染后24-96小時(shí)內(nèi)收獲細(xì)胞。 | 需要2-3周的時(shí)間篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞克隆。 |
通常不適合使用具有誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的載體的研究。 | 適用于使用帶有誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的載體的研究。 |
2）根據(jù)轉(zhuǎn)染方式可以分為化學(xué)，生物，物理方法。
| 轉(zhuǎn)染類型 | 轉(zhuǎn)染方法 | 原理 | 應(yīng)用 | 特點(diǎn) |
| 化學(xué)轉(zhuǎn)染法 | 磷酸鈣法 | 磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)， 瞬轉(zhuǎn) | 不適用于原代細(xì)胞，操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差，有些細(xì)胞不適用 |
陽(yáng)離子 | 帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)， 瞬轉(zhuǎn) | 適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大 | |
DEAE-右旋糖苷法 | 帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞 | 瞬轉(zhuǎn) | 相對(duì)簡(jiǎn)便、結(jié)果可重復(fù)，但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用，轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清 | |
| 生物轉(zhuǎn)入法 | 病毒介導(dǎo)法 | 通過(guò)侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中 | 穩(wěn)轉(zhuǎn) | 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞，體內(nèi)細(xì)胞等 |
逆轉(zhuǎn)錄病毒 | 特定宿主 | 但攜帶基因不能太大細(xì)胞需處分裂期，需考慮安全因素 | ||
腺病毒 | 通過(guò)侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中 | 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染 | 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 | |
| 物理轉(zhuǎn)染法 | Biolistic顆粒傳遞法 | 將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞，DNA在胞內(nèi)逐步釋放表達(dá) | 瞬轉(zhuǎn) | 可用于：人的表皮細(xì)胞，纖維原細(xì)胞，淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞 |
電穿孔法 | 高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，DNA通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn) | 適用性廣但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大 | |
顯微注射法 | 用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn) | 轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞 |
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