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BrainBits小鼠下丘腦培養(yǎng)試劑盒

簡要描述:BrainBits小鼠下丘腦培養(yǎng)試劑盒,包含從新鮮組織開始培養(yǎng)所需的一切。E18組織用2ml含B27的THRYVE胚胎儲存介質(zhì)運(yùn)送。

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時間:2024-10-29
  • 訪  問  量:382
詳情介紹

一、產(chǎn)品簡介

BrainBits小鼠下丘腦培養(yǎng)試劑盒產(chǎn)品組分:1 E18小鼠下丘腦、12mL NbAstro、6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca 1個帶橡膠球的火拋光移液、1PDL涂層蓋板。

二、產(chǎn)品使用

(一)制劑(無菌罩室溫)

1. 6mg無菌木瓜蛋白酶(PAP 6mg)溶解于3ml THRYVE Embryonic-CaCl中,制備細(xì)胞解離液,最終工作濃度為

2毫克/毫升木瓜蛋白酶。在30℃下孵育10分鐘使其溶解。放入冰箱或冰中備用。組織和木瓜蛋白酶必須處于相同的溫度

(根據(jù)處理組織的數(shù)量,可能需要幾個單位)。

2. 80µl臺普蘭藍(lán)(Sigma T8154)加入0.5ml試管中進(jìn)行第9步。

(二)細(xì)胞分散(無菌罩室溫):

1. 2ml移液管,用最少的培養(yǎng)基小心地將組織轉(zhuǎn)移到木瓜蛋白酶上。將THRYVE胚胎wanquan移植到一個新的無菌15ml試管中

保存到步驟3。

2. 組織與木瓜蛋白酶在30℃下孵育10分鐘。輕輕地旋轉(zhuǎn)每2分鐘或使用加熱搖振板在30℃150rpm

3. 2ml移液管從木瓜蛋白酶中除去帶有少量培養(yǎng)基的組織,并從步驟1中返回THRYVE胚胎wanquan培養(yǎng)基。

4. 使用硅化巴斯德移液器,將組織分散不超過10倍或90%,避免產(chǎn)生氣泡??蛇x:加入400µl 1mg/ml DNase I溶液(StemCell Technologies 07469)加入細(xì)胞漿液中,在室溫下孵育15分鐘,輕彈或旋轉(zhuǎn)

5. 讓未分散的碎片靜置1分鐘。

6. 將含有分散細(xì)胞的上清液轉(zhuǎn)移到15ml無菌管中。留下約50μl含有碎片的THRYVE胚胎wanquan體??蛇x70µm濾池過濾細(xì)胞液。

7. 旋轉(zhuǎn)1100rpm (200 x G) 1分鐘。丟棄上清,留下含有微球的約50μl THRYVE胚胎wanquan液。

8. 分散細(xì)胞顆粒(用手指或管輕彈管底部),重懸于1ml NbActiv1™中。

9. 20μl細(xì)胞液加入含有80μl臺盼藍(lán)(1:5稀釋)的0.5ml試管中,或按實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)行計(jì)數(shù)程序計(jì)數(shù)。

10. 使用血細(xì)胞計(jì)(計(jì)算細(xì)胞/ml)或使用當(dāng)前的實(shí)驗(yàn)室程序計(jì)數(shù)細(xì)胞。

(三)細(xì)胞電鍍(無菌罩室溫):

1. NbActiv1™稀釋0.2ml/cm2的細(xì)胞,并以16,000個細(xì)胞/cm2或所需濃度進(jìn)行板載。

2. 37℃,5% CO2, 9% O2, 95%濕度(或環(huán)境O2)孵育。

3. 4天后,神經(jīng)元顯示軸突和樹突;突觸和動作電位開始于7天。

4. 3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養(yǎng)基。

(四)可行性分析:

1. 37℃HBSS 0.2ml/cm2底物)沖洗兩次。

2. 15mg/ml雙醋酸熒光素丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶水原液配制染料混合物,各稀釋15µl,加入1.5ml HBSS1:100稀釋)。

3. 在步驟1中加入的0.2ml HBSS中加入20µl染料混合物(1:10稀釋)。

4. 1分鐘后,使用適合熒光素?zé)晒獾乃{(lán)色激勵(綠色細(xì)胞)計(jì)數(shù)活細(xì)胞。用綠色激勵計(jì)數(shù)死細(xì)胞碘化丙啶熒光(小紅核)。

5. 生存能力=(綠色細(xì)胞/單位面積)/(總細(xì)胞數(shù)/單位面積)或生存=綠色細(xì)胞/(綠色+紅色細(xì)胞)。

三、產(chǎn)品目錄表

SKU

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品品牌

KTC57EHT

小鼠下丘腦培養(yǎng)試劑盒

Transnetyx Tissue BrainBits

三、代理簡介

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