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一、流式細(xì)胞術(shù)特點速度快:流式細(xì)胞術(shù)是一種快速的實驗技術(shù)，通過對單個細(xì)胞或生物顆粒進(jìn)行逐個檢測，測量速度可達(dá)每秒數(shù)千甚至上萬個細(xì)胞。靈敏度高:每個細(xì)胞只需帶有1000~3000個熒光分子，流式細(xì)胞術(shù)就能夠準(zhǔn)確檢測出來。這種高靈敏度的特性使得流式細(xì)胞術(shù)成為研究復(fù)雜生物系統(tǒng)和細(xì)胞內(nèi)分子水平變化的重要工具。多參數(shù):可應(yīng)用于多參數(shù)分析，通過多色熒光染色同時對單個細(xì)胞或生物顆粒的多種特征進(jìn)行細(xì)致分析。這種高度精密的方法使研究人員能夠深入研究細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)和功能，為疾病診斷和治療提供重要...

分析型流式細(xì)胞儀檢測原理將待測樣品制成單細(xì)胞懸液，在鞘液的包裹下進(jìn)入流式細(xì)胞儀內(nèi)的檢測區(qū)域，細(xì)胞在激光的照射下會發(fā)生散射和折射，產(chǎn)生的散射光信號和熒光信號由不同的通道接收。其中前向角散射光（FSC）的強(qiáng)度與細(xì)胞直徑成正相關(guān)，可以理解為細(xì)胞直徑越大，F(xiàn)SC越強(qiáng)，細(xì)胞直徑越小，F(xiàn)SC越弱。所以可以利用細(xì)胞的FSC值初步比較細(xì)胞的大小，利用FSC值對細(xì)胞進(jìn)行分群和分類。側(cè)向角散射光（SSC）的強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度成正相關(guān)（與細(xì)胞中所含的細(xì)胞器、細(xì)胞核等的數(shù)量成正比），可以理...

一、流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry，F(xiàn)CM）從字面意義理解，F(xiàn)low—Fluid、Cyto—Cell、Metry—Measurement，是一種對液流中排成單列的細(xì)胞或其它生物微粒（如微球，細(xì)菌，小型模式生物等）逐個進(jìn)行快速定量分析和分選的技術(shù)。其特點是通過快速測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收來定量測定細(xì)胞DNA含量、細(xì)胞體積、蛋白質(zhì)含量、酶活性、細(xì)胞膜受體和表面抗原等許多重要參數(shù)。根據(jù)這些參數(shù)將不同性質(zhì)的細(xì)胞分開，以獲得供生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究用的純細(xì)胞群體...

01出現(xiàn)嚴(yán)重的RNA污染如圖所示，質(zhì)粒提取之后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，出現(xiàn)明顯的RNA條帶，說明有RNA污染。原因及解決方法：（1）未在緩沖液RS*中事先加入RNaseA。解決方法：補加RNaseA。（2）加入RNaseA的緩沖液RS*長期保存于室溫，導(dǎo)致RNaseA活性下降。解決方法：每次使用后置于4℃保存。若長期不用，置于-20℃保存。（3）細(xì)菌過量,RNaseA不能有效降解RNA。解決方法：將細(xì)菌用量減半或增加RNaseA在緩沖液RS*中的濃度。02出現(xiàn)基因組污染（1）菌體...

一、質(zhì)粒質(zhì)粒是一種環(huán)狀的小分子DNA，是進(jìn)行DNA重組的常用載體，在分子生物學(xué)研究和基因治療中對于質(zhì)粒的產(chǎn)量和質(zhì)量都有一定的要求，其中超螺旋比例和內(nèi)毒素含量是影響質(zhì)粒質(zhì)量的兩個重要因素。雖然超螺旋通常是主要形式，但在所有質(zhì)粒制備中，切口和線性DNA形式通常作為次要形式回收。但是，如果操作不當(dāng)?shù)脑?，超螺旋形式的DNA質(zhì)粒的收獲率可能不高，那么如何提高質(zhì)粒DNA的超螺旋比例呢？二、提高質(zhì)粒超螺旋比例的方法（1）在生長平臺期收獲細(xì)菌培養(yǎng)物在對數(shù)生長過程中過早收獲細(xì)菌時，經(jīng)常會看到帶...